中国骨伤2005年8月第18卷第8期
武震 ，刘晓化 ，李魁章 ，曲建波 ，马龙 ，王海亮
(1．武警黑龙江总队医院外二科，黑龙江哈尔滨150076；2．黑龙江中医药大学附属一院)
摘要目的：研究银杏叶提取物局部应用对坐骨神经再生的影响。方法：选Wistar大鼠32只，随机分为银杏叶提取物组和对照组。在双目放大镜下切断两组大鼠右侧坐骨神经，于神经损伤处和周围肌肉间隙内注射药物后立即行缝合术。2周后进行坐骨神经功能指数、电生理学和组织形态学观测评定。结果：银杏叶提取物组各项指标均优于对照组，其坐骨神经功能指数的恢复、神经纤维的生长速度及数量明显优于对照组。结论：银杏叶提取物局部应用可有效促进大鼠坐骨神经损伤的早期再生，加快神经再生速度与神经功能恢复。
关键词 坐骨神经； 创伤和损伤； 银杏叶提取物； 神经再生
周围神经完全损伤后，所属感觉、运动和营养作用丧失，对肢体功能影响很大，若不修复神经，肢体功能不易恢复，尤其是感觉和营养方面是无法补救的。然而，周围神经损伤修复后的疗效仍不理想，其中原因之一是缺乏经济有效和使用方便的促进神经再生的药物，因此，我们设计了动物实验来研究银杏叶提取物局部应用对坐骨神经再生的影响。
1 材料与方法
1．1 实验动物 成年Wistar清洁级雌性大鼠32只，体质量220-250 g，购自黑龙江中医药大学实验动物中心。
1．2 药品及试剂 金纳多(银杏叶提取物注射液，EGB)：德国威玛舒培博士药厂生产(进口药品注册证号：BX20010117)。苯巴比妥纳：天津市氨基酸公司人民制药厂生产(批号：20000921)。氨苄青霉素粉剂：哈药集团制药总厂生产(批号：20010320)。
1．3 动物模型的建立 选取雌性Wistar大鼠32只，体质量220-250 g，按手术先后随机分成银杏叶提取物组(EGB)和对照组，每组16只。将大鼠用1％苯巴比妥钠(50 mg／kg)作腹腔内注射麻醉，无菌条件下统一在大鼠右侧臀部行1．5 cm切口，于臀肌间隙显露坐骨神经，在5倍双目放大镜下将梨状肌下缘下1 elD_范围仔细游离后，距梨状肌下缘0．5 crn处用刀片横行切断神经，按不同处理方法即刻于神经切断处及周围肌肉内注射药物。EGB组注射药液0．5 ml(EGB 3．5 mg／ml，银杏黄酮苷0．48 rng／m1)，对照组注射生理盐水0．5 ml，用7／0无创尼龙针线原位行神经外膜吻合术，每条神经缝合2针，缝合时根据断面神经轴突分布情况和神经干表面营养血管走行情况，保持神经的对合平直且无扭转，缝合神经后分层缝合切口。术后两组大鼠分笼饲养，条件相同，均饮用氨苄青霉素水剂7 d，术后7 d开始进行坐骨神经功能指数(SFI)评定，术后14 d处死。
1．4 SFI测定 自制大鼠足印行走箱，长50 cm，宽15 cm，高20 cm，通道远端放置一个鼠箱，单侧开门。行走箱箱底放置与行走箱等长、等宽的白纸。用碳素墨水浸染大鼠双后足，放入行走箱近端，让其向远端行走，可记录大鼠双侧后足足印每侧3～4个。选实验侧足(E)和正常侧足(N)足印测定3个变量(见图1)：① 足印长度(podogram length，PL)：即从足跟到足尖的距离；②足趾宽度(width between the first and fifth toes，TW)：第1趾到第5趾连线距离；③ 中间足趾距离(inter—toes distance，IT)：第2趾到第4趾连线距离。测量精确到毫米，每次使用最长的一组数据。
1．5 电生理学检查 术后14 d记录足印后处死大鼠，沿手术切口人路暴露切取右侧坐骨神经全长，置于台氏液中，电极置于神经吻合口两侧各2．5 c3"n处，采用PCLab生物信号采集处理系统(黑龙江中医药大学生理教研室提供)记录诱发电位并计算坐骨神经运动传导速度(MNCV)。
1．6 组织学观察 电生理检测后将神经用中性甲醛液固定，石蜡包埋，分别取坐骨神经缝合段3 rain作纵切片，缝合段近、远侧各3 inin作神经干横切片，作HE染色，光镜观察。
1．7 统计学处理 将各组大鼠SFI和MNCV的数据采用均数和标准差计算，以5—12±S表示，组间比较采用t检验。
2 结果
2．1 实验组大鼠一般状态 术后2组大鼠均无明显异常行为。术后24 h起睡眠和食欲无明显变化，无一例出现伤口感染或死亡。EGB组大鼠右侧坐骨神经表面普遍比对照组光滑，容易从组织中分离和显露，外膜血管丰富。
2．2 坐骨神经功能指数测定 术后14 d分别观察测定2组大鼠SFI，对照组2只大鼠无法获得可测量资料。结果显示：EGB组的SFI(一65．75±2．40)明显优于对照组SFI(一95．33±9．36)，t=12．2，差异有显著性意义(P<0．01)。
2．3 电生理学测定结果比较 术后14 d测定的运动神经传导速度结果经统计分析，EGB组(1．21±0．23)m／s明显优于对照组(0 m／s)，t=20．957，差异有显著性意义(P<0．01)。
2．4 组织学结果比较术后14 d见神经缝合口的神经外膜均已融合，光镜观察见EGB组雪旺细胞增生成索，轴突再生出现许多小枝，新生的轴突分支长入雪旺细胞索内，与相应细胞组织重新建立联系，对照组神经纤维再接未成，轴突和髓鞘溃变断裂，新生的轴突分支纠缠成团。
3 讨论
周围神经损伤后，其所支配肌肉、皮肤的运动、感觉功能即发生障碍，甚至完全丧失而影响功能，属中医的经络伤、痿证范畴。祖国医学对周围神经损伤发病过程的解释主要是早期气滞血瘀，经络不通；中晚期气血两虚，经气不续。治宜补气生肌，活血通络[4]。EGB对中枢神经系统损伤的保护及损伤神经元的恢复作用已获得实际效果，被认为是治疗脑功能损害的有效药物，已大量临床应用。
本实验中EGB组术后14 d光镜下可见雪旺细胞增生成索，与相应细胞组织重新建立联系，而对照组轴突和髓鞘溃变断裂，神经纤维再接未成，且未测得运动神经传导速度，可以说明EGB影响了局部的微循环，改善了微环境条件，从而缩短了瓦勒变性期，促进了神经早期再生。张烽等 5发现EGB761腹腔给药有促进大鼠坐骨神经再生及减少神经元凋亡的作用。银杏叶提取物为第四代银杏叶提取制剂，标定含有24％的银杏黄酮苷和6％ 的萜类 6。现已证实的药理作用有：① 中和及清除自由基；②提高缺血组织对氧及葡萄糖的利用；③改善微循环；④保护线粒体及稳定生物膜；⑤增加某些神经递质受体的数量。我们认为，局部应用EGB促进大鼠坐骨神经早期再生的机制主要如下：①提高缺血神经细胞对氧及葡萄糖的利用，增加神经细胞的生存力；②有效地清除自由基，降低局部氧化代谢水平，减少对神经组织的破坏；③ 改善损伤处的微循环，提高微动脉血流量，提高巨噬细胞活性，加快变性坏死物质的清除；④通过线粒体和生物膜的保护及神经递质受体的增加，促进雪旺氏细胞增生分裂，促进轴浆流的恢复，缩短瓦勒氏变性期。总之。可以说是通过影响微循环，调节了神经再生微环境。促进了周围神经的早期再生。
参考文献
1 陆裕朴．实用骨科学．北京：人民军医出版社．1991．855—872．
2 徐建广，顾玉东．大鼠坐骨神经显微解剖及其意义．上海医学，1999，22(3)：15．
3 Bain JR。Macknnon SE。Hunter DA．Fun etional eral nation of corn—
plete sciatic，peroneal，and posterior tibiM nerve in the rat．Plast Recon—
st~urg，1989，83(1)：129—136．
4 何振辉．补气通络方对大鼠坐骨神经损伤后小腿三头肌湿重的影
响．中国中医骨伤科杂志，2001，9(1)：10．
5 张烽，顾玉东．中药EGB24／6对鼠坐骨神经损伤后神经元保护的
实验研究．中华医学杂志，2000，80(5)：230—231．
6 李开泉．银杏叶的化学研究．江西中医学院学报，2002，14(1)：61．
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