中国临床药学杂志 CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACY 2005年第l4卷第5期
张宏文 ，王蔚青 ，蒋桂平 ，刘广余 ，郑爱民 ，钱 靖
( 南京医科大学第一附属医院临床药物研究室，南京210029；
南京医科大学第二附属医院药剂科，南京210050)
【摘要】 目的：评价国产与进121利鲁唑片剂的生物等效性。方法：20名健康志愿者单剂量随机交叉121服150 mg国产和进121利鲁唑片剂，血浆样品经Cl8小柱提取纯化，高效液相色谱一紫外检测器测定利鲁唑血药浓度。结果：国产与进121利鲁唑片剂的药动学参数分别为：c (860．02-4-247．45)、(713．05-4-214．35)tsg·L- ；t (0．9-4-0．4)、(1．1-4-0．5)h；AUc 24(3 035．41-4-760．35)、(3 161．78-4-760．99)gg h‘ 。；AUC0一 (3 172．83-4-804．46)、(3 396．09-4-742．35)gg·h·L 0；Tl／2(5．82-4-1．16)、(7．51±2．30)h。国产利鲁唑片的相对生物利用度F 24为(97．1±13．9)％。结论：国产和进口利鲁唑片具有生物等效性。
【关键词】 固相萃取； 高效液相色谱； 利鲁唑； 生物等效性
【中图分类号】R964； R945 【文献标识码】A 【文章编号】1007．44o6(2005)05—0288．04
Bioequivalence of riluzole in healthy male volunteers
Zhang Hongwen ，Wang Weiqing ，Jiang Guiping ，Liu Guangyu ，Zheng Aimin2，Qian Jing ( Department of Clinical
Pharrmwology，The First Affiliated Hospital of Na ng Medical University，Na ng 210029，China； Department of
Pharmaly，The Second Afiliated Hospital of Na ng Medical University，Nanjing 210050，China )
【ABSTRACT】 AIM To evaluate the bioequivalence of domestic and imported filuzole tablets．METHODS Single
oral does(150 mg)of filuzole(domestic and imported)was given to 20 healthy male volunteers in a randomized cross—over
study．Riluzole was extracted from plasma by solid—phase extraction and assayed by a validated HPLC method with ultravi—
olet detection．The concentrations of filuzole in plasma was assessed with non—compartment model to obtain the pharma—
cokinetic parameters．The relative bioavailability was calculated．Variance analysis an d two—one sided test statistical analy—
sis were performed for pharm acokinetic parameters．RESULTS The main pharmacokinetic parameters for domestic and
imported riluzole．were as follows：Cmax(860．02±247．45) g。L- and(713．05±214．35) g·L- ；tmaxwas(0．9 4-0．4)h
and(1．1 4-0．5)h；AUCo~24was(3 035．41 4-760．35)t~g‘h‘L- and(3 161．78 4-760．99)t~g‘h·L- ；AUC was(3 172．83 4-
804．46)t~g‘h·L- and(3 396．09 4-742．35)t~g·h‘L- ；Tl／2 was(5．82 4-1．16)h and(7．51 4-2．30)h．The relative bioavail—
ability was(97．1 4-1 3．9)％ ．CONCLUSION The result of the statistical analysis shows that the two formulations are
bioequivalent．
【KEY WORDS】 solid—phase extraction； HPLC； filuzole； bioequivalence
利鲁唑(riluzole)为苯噻唑类化合物，1996年作为谷氨酸释放抑制药用于治疗肌萎缩侧索硬化症(amyotmphic lateral sclerosis)。此外，大量动物及临床试验证明，利鲁唑对阿尔茨海默病、帕金森病、脑卒中或脑损伤等神经伤害或退行性疾病均有明显疗效。我们采用固相萃取反相高效液相色谱法测定了利鲁唑血药浓度，研究了国产与进口利鲁唑片剂在2O名健康志愿者体内的生物等效性。
1 材料与方法
1．1 药品与试剂
试制剂：利鲁唑片(徐州恩华药业集团有限责任公司，批号031009，每片含利鲁唑50 nag)；参比制剂：利鲁唑片(商品名：力如太片，Aventis pharmas．A，批号BN28079，每片含利鲁唑5Omg)；内标盐酸非那吡啶(山东长兴药物研究所)；利鲁唑对照品(鲁南制药股份有限公司，标示量99．8％)。甲醇(色谱纯，上海陆都化学制剂厂)；冰醋酸(分析纯，上海化学试剂公司)；KH2P04及K2HP04(分析纯，南京化学试剂厂)；三蒸水(自制)。
1．2 仪器Waters高效液相色谱仪：515泵及486可变波长紫外检测器；Rheodyne 7725i进样阀；SupeleoVISIPREprMDL固相萃取真空多歧管装置；LC．18 SPE固相萃取小柱；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息研究所)。
1．3 试验方案
1．3．1 受试者20名健康男性受试者，年龄(20．7±O．7)a，身高(170．9±3．6)cm，体重(61．1±2．5)kg，体重偏差不超过中国人标准体重10％。试验前2wk全面体检及实验室检查，BP、HR、ECG、呼吸、肝肾功能和血象均正常。无吸烟和饮酒史，受试前2 wk及整个试验期间不服用其他任何药物。试验方案经本院医学伦理委员会批准，在被告知所有与该药物可能有关的不良反应后，受试者在试验前签署知情同意书。服药及采血期间受试者均留置本院工期临床病房观察，医护人员实施临床监护，试验期间统一饮食。
1．3．2 试验步骤采用单剂量双交叉试验设计，2O名男性健康受试者随机分成A、B 2组，剂量均为150mg，2次服药间隔7 d。试验前禁食过夜12 h后，于次日晨7：o0空腹服用受试制剂或参比制剂，200 mL温开水送服。服药后2 h自由进水，4 h后统一给予低脂膳食。于服药前及服药后0．25、0．5、0．75、1、
1．5、2、3、4,6、8、1O、12、16、24 h时间点依次取上肢静脉血4 mL于肝素化试管中，分离出血浆，置一2O℃保存待测。
1．4 测定方法
1．4．1 色谱条件 色谱柱Kromasil Cl8(20 mill×4．6mill，5 tan)；柱温：室温，流动相：甲醇一水一乙腈(55：35：10，V／ )，流速：1 mL·min" ，紫外检测波长265 nm。
1．4．2 标准溶液的配制
1．4．2．1 对照品溶液精密称取利鲁唑10 mg于1OmL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即为1 g·L 的利鲁唑储备液。取上述储备液1 mL于10 mL容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，得100 mg·L 的标准溶液。同样操作得1O及1 mg·L 的标准溶液。
1．4．2．2 内标液精密称取盐酸非那吡啶1 mg置于lO nL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即为内标储备液。取2 mL储备液于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度即为内标液(20 mg·L )。
1．4．3 血浆样品预处理 于离心试管中加入血浆样品1 mL，精密加入内标液4O (20 mg·L )旋涡20 S，将血浆混匀，依次用1 mL甲醇及1 mL蒸馏水活化的固相萃取小柱，将已混匀的血浆样品上柱，分别用蒸馏水1 mL，40％ 甲醇1 mL冲洗杂质后，用1mL甲醇洗脱组分，收集洗脱液，于4O℃水浴挥干，残渣用5O 甲醇溶解，2O 进样。
1．4．4 样品的色谱行为 在本试验采用的色谱条件下，测得空白血浆、空白血浆加标准品、受试者服药2 h后血浆样品的色谱图(图1)。可见利鲁唑与内标有较好的分离度，血浆中杂质不干扰样品峰及内标峰的测定，基线噪音小。
1．4．5 利鲁唑线性范围及检测限 取空白血浆加不同量的标准液，使利鲁唑血药浓度分别为1O、5O、100、200、400、800、1 600、和3 200 g· 。按“1．4．3”项下操作，记录内标及样品峰面积。以样品与内标峰面积之比(厂)为纵坐标，血药浓度(c)为横坐标作回归分析，得回归方程为f=0．012 23+2．053 0 x100c(r：0．999 9)，线性范围为10—3 200 g· ，最
低定量浓度为5 g·L一。
1．4．6 方法精密度和回收率实验 取空白血浆加入不同量的标准品，使其浓度分别为50、400、1 600g· ，按“1．4．3”，项下操作，日内重复测定5次，日间重复测定5 d。结果见表1。
1．4．7 冻融稳定性实验 配制利鲁唑浓度分别为50、400、1 60O P．g· 的血样，按“1．4．3”顶下操作，立即进样，其余放置冰箱一20cI=保存24 h。室温融解，按“1．4．3”项下操作HPLC法测定峰面积，如此反复3次冻融。比较3次冻融的峰面积与冻融前峰面积，RSD<10％，符合生物样品分析要求。
1．5 统计学处理 主要药动学参数c tmax均为实测值，AUC 采用梯形法计算；AUc =AUc +
c／入：。式中c 为服药后24 h的血药浓度， 为消除速率常数。相对生物利用度F=[AuC 24(test)／AUC0一拼(reference)]x 100％ 。生物等效性评价方法：所得参数AUC、Cmax进行自然对数转换后先用双交叉试验设计的方差分析，再用双单侧t检验进行生物等效性评价，t 经非参数检验(Wileoxon符号秩检验)进行统计分析。
2 结果
2．1血药浓度 20名男性健康受试者单剂量口服国产和进口利鲁唑片150 mg后的药一时曲线见图2。
2．2 主要药动学参数20名健康受试者单剂量口服国产和进口利鲁唑片150 mg后主要药动学参数值见表2。
2．3 生物等效性评价对受试制剂和参比制剂的主要药动学参数Cmax、AuC 进行对数转换后行方差分析，显示2种制剂给药周期间和药物间均无显著性差异(P>0．05)；进行双单侧t检测结果表明，AuC0一拼和c 的90％置信区间均在规定范围内，经非参数检验示无显著差异(P>0．05)，故认为2种制剂等效。受试者交叉口服利鲁唑的受试和参比制剂后，且AUC 。计算相对生物利用度为(97．1-I-13．9)％。
表2 口服单剂量150 mg利鲁唑片后的药动学参数
3 讨论
我们建立的用于测定血浆利鲁唑浓度的固相萃取。HPLC法，准确、灵敏度高、重现性好、专一性强。由于临床应用剂量范围(50—200 mg)的利鲁唑在人体内血药浓度较低，直接沉淀后进样的方法灵敏度难以达到药动学测定的要求，国外报道用MC同位素测定含量或以质谱测定含量-2 J。本试验中利用固相萃取富集一浓缩的作用以测定其含量，达到所需灵敏度。本研究中利鲁唑的主要药动学参数c一、AUC经方差分析发现个体问存在显著性差异，且试验期间4个次出现头晕、恶心等药物不良反应，但未经特殊处理自行缓解，提示个体在药物吸收方面存在差异。同时与文献[3]报道比较，药动学参数t 相近，但c一和AUC偏高，可能是由于人种和国内外研究的差异。故从健康受试者临床反应及吸收的差异提示临床用药应考虑个体化给药，最好能进行血药浓度监测，密切关注药物不良反应。
【参考文献】
[1]粟文杰．利鲁唑的药理作用及其机制的研究进展[J]．国外医学·药学分册，2003，30(2)：90．
[2]Le-liboux A，Paul-Caehia J，Kirkesseli S。et a1．A comparison of the
pharmacokinetics and tolerability of riluzole after repeat dose administration
in healthy elderly and young volunteers[J]．J Clin Pharmacol，1999，39(5)：480．
[3]Le Lihoux A，Lefehvre P，k Roux Y，et a／．Single-and multiple-dose
pharmaeokinetics of riluzole in white subjects[J]．J Clin Phmnacol。
1997，37(9)：820．
